高二生物微生物的實驗室培養知識點整理

　　實驗題一直都是高中生物考試的大題，也是難點，下面是小編給大家帶來的，希望對你有幫助。

　　高二生物微生物的實驗室培養知識點

　　一、配製時的質量控制

　　***1***容器：配製和分裝培養基的燒瓶、平皿或試管等器材應為中性，無酸、鹼抑制物殘留，平皿底部要平，以免瓊脂厚薄不一，影響藥敏試驗結果。

　　***2***成分來源：各種成分來源可靠，不含對目的菌生長有抑制的物質。特殊要求的培養基，如葡萄糖氧化發酵試驗***O/F 試驗***，除加入葡萄糖外，不能含有其他糖類，指示劑不能用乙醇溶液，避免O/F試驗的假陽性。培養基配製用水應是蒸餾水。

　　***3***pH值調整：根據培養基的不同要求調整pH 值，控制在要求範圍的±0.2之內。應當注意，培養基在高壓滅菌後其pH 值降低0.1～0.2，故矯正時應比實際需要p H值高0.1～0.2。

　　***4***滅菌：根據培養基所含成分及配製數量的不同，選擇不同的滅菌方式，既要達到滅菌效果，又不破壞培養基成分。一般對穩定的培養基，如MH瓊脂、營養瓊脂可用高壓滅菌，即121℃15min ;而含糖的培養基則以108℃滅菌為好，以防止糖類破壞。不耐高熱的物質如血清、牛乳等，可採用間隙滅菌法滅菌。

　　***5***分裝：根據使用的目的和要求決定分裝量。分裝培養基所用的平皿、試管要求清潔，不殘留酸鹼;製備平板培養基時，操作檯要水平，以避免瓊脂平板厚薄不一，同時確保無菌操作。

　　二、配製後質量控制

　　***1***培養基外觀情況：包括顏色、透明度、有無沉澱和凝固。如發現培養基表面有裂紋或與培養皿的邊緣分離，說明培養基有脫水現象，必須丟棄。

　　***2***無菌試驗：每一批配好的培養基均須進行無菌試驗。先滅菌後分裝的培養基，可採用抽樣方法試驗，少於100個樣本通常選取5%～10%的量，如果配製大量培養基，則任意選取10 個培養基;無菌分裝培養基則需全部做無菌試驗。樣本在35 ℃ 或其他適宜的溫度下隔夜培養，如培養基含有血液，則需再置於室溫1天，以檢查嗜冷菌。選擇性培養基因含有抑制物質，能抑制許多微生物，因此，可加入10倍量的無菌液體培養基，稀釋抑制物質，以利於檢出汙染菌。即使做過無菌試驗，接種時，也要檢查每個平板上的可見菌落。

　　***3***效能測試：每一批新制或新購的培養基，使用前均須取已知性質的庫存菌種進行效能測試。培養基按目的不同可分為增菌培養基、分離培養基和鑑定培養基。

　　①增菌培養基：接種少量難以生長的細菌，在一定時間內觀察增菌情況，細菌能生長的最小接種濃度越小，說明增菌培養基效能愈好。

　　②分離培養基：要求目的菌生長良好，非目的菌被抑制。一般要求生長的目的菌接種量不可過多，較好的方法是將測試菌調成0.5麥氏濁度的菌懸液，再用0.001ml的標準接種環塗劃在培養基上，觀察菌落生長。

　　③鑑定培養基：應選擇具有典型特徵的菌株作效能試驗。如三糖鐵瓊脂，須用弗勞地枸櫞酸桿菌、福氏志賀菌及銅綠假單胞菌3種菌分別接種3支培養基，若反應結果為斜面產酸/高層產酸、硫化氫陽性，斜面產鹼/高層產酸，斜面產鹼/高層產鹼，質量才算合格。