含羞草科學論文

　　含羞草***Mimosa pudica L.***，是豆科含羞草屬多年生草本花卉，原產於美洲熱帶地區.小編為大家整理的，希望你們喜歡。

　　篇一

　　含羞草中總黃酮提取純化工藝研究

　　【摘要】 　　目的研究提取純化含羞草中總黃酮的最佳工藝條件。方法以蘆丁為對照，含羞草總黃酮得率為考察指標，通過正交實驗法優選超聲提取總黃酮的最佳工藝。在此基礎上，採用真空薄膜濃縮，超聲脫色，大孔吸附樹脂Diaion HP-20吸附分離純化含羞草總黃酮提取物。結果最佳提取工藝為用10倍量的80%乙醇為溶劑超聲提取3次，10 min/次。最佳分離純化工藝為：採用大孔吸附樹脂Diaion HP-20進行分離富集，以不同濃度的乙醇進行梯度洗脫，洗脫流速為5 ml/min，收集40%～60%乙醇洗脫部位並減壓濃縮得總黃酮提取物，總黃酮的含量達到76%。結論優化了含羞草中總黃酮的提取純化方法，為含羞草資源的綜合利用和產業化開發提供了 參考 。

　　【關鍵詞】 含羞草 總黃酮 提取 純化

　　含羞草為豆科含羞草屬植物含羞草Mimosa pudica的全草[1]，又名知羞草、怕羞草、喝乎草、刺含羞草等。主要分佈在我國華東、華南、西南等地的山坡叢林、溼地、路旁,具有清熱利尿、化痰止咳、安神止痛、涼血止血之功效，臨床多用於急性肝炎、神經衰弱、失眠、肺結核咳血、血尿、結膜炎、跌打損傷、帶狀皰疹等症[2]。含羞草中含有大量對人體有益的活性物質，包括黃酮類、酚類、生物活性多糖、氨基酸類、有機酸類和其它微量元素。其中的黃酮類化合物具有顯著的生理活性[3～5]，如抗脂質過氧化、抗衰老、清除自由基、抗腫瘤，降低血脂、抗菌抑菌、增強免疫力等作用。本文通過正交實驗考察了超聲提取含羞草總黃酮的工藝，同時採用大孔吸附樹脂進行吸附分離，並結合真空薄膜濃縮、超聲脫色等方法對含羞草提取物進行分離與純化，以期為 工業 化生產提供參考依據。

　　1 儀器與材料

　　1.1 儀器UV-2102PCS紫外可見分光光度計***上海龍尼柯儀器有限公司***;KQ-250B超聲波提取器***崑山市超聲儀器有限公司***;NJL07-3型實驗專用微波爐***南京傑全微波裝置有限公司，額定功率800W***;Millipore Simplicity型超純水器***美國Millipore公司***;RE-52A旋轉蒸發儀***上海亞榮生化儀器廠***;真空薄膜濃縮裝置[6]***自裝***;101-1型電熱恆溫乾燥箱;微量分析天平***EETTLER AE 240瑞士***，微孔濾膜***上海醫藥工業研究院***;蘆丁對照品*** 中國 藥品生物製品鑑定所提供***。

　　1.2 材料與試劑

　　含羞草於2003-05採自海南三亞,由海南大學植物學教授黃世滿鑑定為豆科含羞草屬植物含羞草的全植株;所用試劑均為分析純。

　　2 方法與結果

　　2.1 標準曲線的繪製

　　準確稱取乾燥恆重的蘆丁對照品12.8 mg，加60%乙醇***體積分數，下同***溶解並定容置100 ml的量瓶中，搖勻得質量濃度為0.128 g/L的對照品溶液。分別取上述蘆丁標準溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml於6只10 ml量瓶中，用60%乙醇補充至5 ml，各加入0.3 ml 5%亞硝酸鈉，搖勻，放置5 min後各加入10%硝酸鋁0.3 ml，搖勻。5 min後再加入1 mol/ml的氫氧化鈉溶液4 ml，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度。10 min後於510 nm處測吸光度，試劑為空白參比，以蘆丁質量濃度為橫座標，吸光度為縱座標繪製標準曲線，用最小二乘法進行線行迴歸,得蘆丁含量與吸光度之間的迴歸方程:A=9.049 1C+0.006 4, r=0.999 7。

　　2.2 不同溶劑提取所得提取物得率及總黃酮得率的比較

　　2.2.1 不同溶劑提取所得提取物的得率比較

　　稱取粉碎並過60目篩後的含羞草原料4份，每份20 g，分別選用50%的乙醇、80%的乙醇、甲醇、70%的丙酮4種不同的溶劑進行索氏提取，溶劑用量均為200 ml，提取時間為5 h。分別將提取液濃縮至稠膏狀移入烘箱中烘乾至恆重。稱重， 計算 得率。結果見表1。表1 不同溶劑提取所得提取物及得率的比較***略***

　　2.2.2 不同溶劑提取所得總黃酮的得率比較

　　分別吸取一定量由不同溶劑提取所製得的含羞草提取液於10 ml量瓶中，新增60%乙醇溶液使體積約為5 ml，按照上述繪製蘆丁標準曲線的方法，依次加入0.3 ml 5%亞硝酸鈉、0.3 ml 10%硝酸鋁、4 ml 1 mol/ml的氫氧化鈉溶液，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度。靜置20 min後用紫外可見分光光度計法測定不同溶劑提取所得提取液的吸光度，重複3次測定，並根據標準曲線換算出總黃酮的得率，計算平均含量及RSD。結果見表2。表2 不同溶劑提取所得提取物中總黃酮的得率比較***略***

　　由表1可以看出，由4種不同的溶劑進行索氏提取，以70%丙酮進行提取所得提取物的得率為最高;由表2可以看出，以80%乙醇為溶劑進行提取，所得提取物中總黃酮得率相對最高。雖然以70%丙酮提取得率最高且總黃酮的得率與用80%乙醇提取相當，但考慮到乙醇與丙酮相比，具有無毒安全，廉價易得的優點，故提取溶劑選用80%乙醇。

　　2.3 超聲提取工藝的優選

　　2.3.1 樣品溶液的製備與測定分別精密稱定乾燥並過60目篩的含羞草粗粉9份，每份20.00 g，以80%乙醇為溶劑，按正交實驗表中所選取的因素水平分別進行超聲提取。分別吸取一定量含羞草超聲提取液於10 ml 量瓶中，新增80 %乙醇溶液使體積約為5 ml，按照上述繪製蘆丁標準曲線的方法，依次加入亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉溶液，混勻，用80%乙醇稀釋至刻度。靜置20 min後測定吸光度， 計算 樣品中總黃酮的含量。

　　2.3.2 正交設計通過正交實驗，以蘆丁的含量為考察指標，通過紫外法對超聲提取方法進行正交實驗，以優選出最佳提取工藝。選用L9***34***正交方案，以超聲時間、超聲次數及溶劑用量3個因素，每個因素3個水平設計實驗方案。結果見表3～4。表3 考察因素與水平***略***表4 正交實驗設計及實驗資料***略***

　　2.3.3 超聲提取最佳工藝

　　從表4中的直觀分析可以明顯看出提取的最佳組合為A1B3C3，即用10倍量的80%乙醇為溶劑超聲提取3次，10 min/次。

　　2.4 分離純化工藝優選大孔吸附樹脂Diaion HP-20特別適合對黃酮苷類化合物的富集分離，因此本實驗採用大孔吸附樹脂Diaion HP-20對含羞草黃酮粗提物進行分離純化。具體操作為：取藥材1 kg，乾燥後粉碎過60目篩，按照以上最佳工藝進行超聲提取，得到的粗提物經真空薄膜濃縮至體積減半，加2%活性碳室溫超聲脫色2次，20 min/次。抽濾，除去濾渣後繼續真空薄膜濃縮至無醇味，得提取物。用大孔吸附樹脂Diaion HP-20進行溼法裝柱***色譜柱：6 cm×80 cm，柱體積：450 ml***，以水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、乙醇溶劑系統進行梯度洗脫，控制洗脫流速為5 ml/min。分別收集不同濃度的乙醇洗脫液。將各部分洗脫液進行真空薄膜濃縮、後轉移至旋轉蒸發儀中真空濃縮至乾燥粉末，計算得率。同時按照上述的紫外法檢測總黃酮的含量。結果見表5。表5 大孔吸附樹脂分離純化實驗結果***略***

　　由表5可看出，用中等濃度40%乙醇洗脫效果較好，總提取物得率達到43.48%，總黃酮含量可達到87.38%;從洗脫情況看，總黃酮主要集中在40%～60%乙醇洗脫部位，水洗脫部位經理化檢測發現除含少量的黃酮外，還含有較多的多糖等大極性化合物，可將這部分棄去，而20%乙醇、80%乙醇及乙醇洗脫部位相比之下則含少量的黃酮類成分。因此，按照以上方法對含羞草總黃酮粗提物進行分離富集與純化，收集各洗脫部位，將40%～60%乙醇洗脫部位合併，進行真空薄膜濃縮後即可得到總黃酮提取物，經紫外測定總黃酮的含量達到76%。

　　2.5 最佳提取純化工藝

　　由實驗得到最佳提取純化含羞草總黃酮的工藝：新鮮含羞草→乾燥後粉碎→過60目篩→室溫超聲提取→提取液→真空薄膜濃縮至體積減半→濃縮液→加2%活性炭室溫超聲波脫色2次→抽濾除去濾渣→脫色液→繼續真空薄膜濃縮至無醇味→上大孔樹脂Diaion HP-20柱→用水及乙醇混合溶劑梯度洗脫→分別收集洗脫液→將40%～60%乙醇洗脫液合併減壓濃縮至幹→幹浸膏樣品→檢測含量→成品。

　　3 討論

　　本實驗選用蘆丁作為對照品,因為蘆丁是黃酮化合物中比較有代表性的一種，其B環的3，4-鄰二酚羥基部位發生紫外吸收,可以通過測定蘆丁對照品的吸收度,從而求算供試品中總黃酮的含量。這是總黃酮含量測定實驗中比較經典的方法。

　　通過實驗證明，提取含羞草中總黃酮的最佳工藝為用10倍量的80%乙醇為溶劑超聲提取3次，10 min/次。

　　本實驗採用大孔吸附樹脂Diaion HP-20分離含羞草中的黃酮類成分，選擇不同濃度的乙醇溶液進行洗脫，得出40%乙醇溶液洗脫效果較好，總分離物得率達到43.48%，總黃酮含量達到87.38%。另外水洗脫部位得率較高，含少量黃酮，還含有較多的大極性化合物。在用大孔吸附樹脂分離含羞草總黃酮時，可先用水洗脫，除去大量的大極性化合物，減少影響，再用40%乙醇進行洗脫。

　　現代 藥理研究表明，黃酮類化合物在心血管系統、內分泌系統和抗腫瘤方面具有明顯的藥理作用。含羞草總黃酮的藥理活性未見深入研究。本文利用大孔吸附樹脂分離純化含羞草總黃酮，為進一步研究含羞草總黃酮的藥理活性,更好地開發利用含羞草資源奠定了基礎。

　　【 參考 文獻 】

　　[1]江蘇新醫學院.中藥大辭典[M].上海：上海 科學 技術出版社，1986:1147.

　　[2]全國中草藥彙編編寫組.全國中草藥彙編[M].北京：人民衛生出版社，1975:464.

　　[3]華光軍, 郭 勇. 黃酮類化合物藥理研究進展[J]. 廣東藥學，1999,9***4***:9.

　　[4]黃河勝. 黃酮類化合物藥理作用研究進展[J]. 中國 中藥雜誌，2000,25***10***:499.

　　[5]王 瑋, 王 琳.黃酮類化合物的研究進展[J]. 瀋陽醫學院學報，2002,4***2***:115.

　　[6]袁 珂, 俞 莉.真空薄膜濃縮裝置的研製及應用研究[J]. 分析化學,2005,33***9***:1358.

　　篇二

　　含羞草的總黃酮提取技術

　　【摘要】文章分析了提取純化含羞草中總黃酮的最佳工藝條件。優化了含羞草中總黃酮的提取純化方法，為含羞草資源的綜合利用和產業化開發提供了參考。

　　【關鍵詞】含羞草 總黃酮 提取 純化

　　含羞草為豆科含羞草屬植物含羞草Mimosa pudica的全草，又名知羞草、怕羞草、喝乎草、刺含羞草等。主要分佈在我國華東、華南、西南等地的山坡叢林、溼地、路旁,具有清熱利尿、化痰止咳、安神止痛、涼血止血之功效，臨床多用於急性肝炎、神經衰弱、失眠、肺結核咳血、血尿、結膜炎、跌打損傷、帶狀皰疹等症。含羞草中含有大量對人體有益的活性物質，包括黃酮類、酚類、生物活性多糖、氨基酸類、有機酸類和其它微量元素。

　　一、材料與試劑

　　含羞草採自海南三亞,由海南大學植物學教授黃世滿鑑定為豆科含羞草屬植物含羞草的全植株;所用試劑均為分析純。

　　二、方法與結果

　　1、 標準曲線的繪製

　　準確稱取乾燥恆重的蘆丁對照品12.8 mg，加60%乙醇***體積分數，下同***溶解並定容置100 ml的量瓶中，搖勻得質量濃度為0.128 g/L的對照品溶液。分別取上述蘆丁標準溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml於6只10 ml量瓶中，用60%乙醇補充至5 ml，各加入0.3 ml 5%亞硝酸鈉，搖勻，放置5 min後各加入10%硝酸鋁0.3 ml，搖勻。

　　2 、不同溶劑提取所得提取物得率及總黃酮得率的比較

　　1***不同溶劑提取所得提取物的得率比較

　　稱取粉碎並過60目篩後的含羞草原料4份，每份20 g，分別選用50%的乙醇、80%的乙醇、甲醇、70%的丙酮4種不同的溶劑進行索氏提取，溶劑用量均為200 ml，提取時間為5 h。分別將提取液濃縮至稠膏狀移入烘箱中烘乾至恆重。稱重，計算得率。

　　2***不同溶劑提取所得總黃酮的得率比較

　　分別吸取一定量由不同溶劑提取所製得的含羞草提取液於10 ml量瓶中，新增60%乙醇溶液使體積約為5 ml，按照上述繪製蘆丁標準曲線的方法，依次加入0.3 ml 5%亞硝酸鈉、0.3 ml 10%硝酸鋁、4 ml 1 mol/ml的氫氧化鈉溶液，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度。靜置20 min後用紫外可見分光光度計法測定不同溶劑提取所得提取液的吸光度，重複3次測定，並根據標準曲線換算出總黃酮的得率，計算平均含量及RSD。

　　3 、 超聲提取工藝的優選

　　樣品溶液的製備與測定分別精密稱定乾燥並過60目篩的含羞草粗粉9份，每份20.00 g，以80%乙醇為溶劑，按正交實驗表中所選取的因素水平分別進行超聲提取。分別吸取一定量含羞草超聲提取液於10 ml 量瓶中，新增80 %乙醇溶液使體積約為5 ml，按照上述繪製蘆丁標準曲線的方法，依次加入亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉溶液，混勻，用80%乙醇稀釋至刻度。靜置20 min後測定吸光度，計算樣品中總黃酮的含量。

　　4 、 分離純化工藝優選大孔吸附樹脂Diaion HP-20特別適合對黃酮苷類化合物的富集分離，因此本實驗採用大孔吸附樹脂Diaion HP-20對含羞草黃酮粗提物進行分離純化。具體操作為：取藥材1 kg，乾燥後粉碎過60目篩，按照以上最佳工藝進行超聲提取，得到的粗提物經真空薄膜濃縮至體積減半，加2%活性碳室溫超聲脫色2次，20 min/次。抽濾，除去濾渣後繼續真空薄膜濃縮至無醇味，得提取物。用大孔吸附樹脂Diaion HP-20進行溼法裝柱***色譜柱：6 cm×80 cm，柱體積：450 ml***，以水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、乙醇溶劑系統進行梯度洗脫，控制洗脫流速為5 ml/min。分別收集不同濃度的乙醇洗脫液。將各部分洗脫液進行真空薄膜濃縮、後轉移至旋轉蒸發儀中真空濃縮至乾燥粉末，計算得率。同時按照上述的紫外法檢測總黃酮的含量。

　　用中等濃度40%乙醇洗脫效果較好，總提取物得率達到43.48%，總黃酮含量可達到87.38%;從洗脫情況看，總黃酮主要集中在40%～60%乙醇洗脫部位，水洗脫部位經理化檢測發現除含少量的黃酮外，還含有較多的多糖等大極性化合物，可將這部分棄去，而20%乙醇、80%乙醇及乙醇洗脫部位相比之下則含少量的黃酮類成分。因此，按照以上方法對含羞草總黃酮粗提物進行分離富集與純化，收集各洗脫部位，將40%～60%乙醇洗脫部位合併，進行真空薄膜濃縮後即可得到總黃酮提取物，經紫外測定總黃酮的含量達到76%。

　　5 、最佳提取純化工藝

　　由實驗得到最佳提取純化含羞草總黃酮的工藝：新鮮含羞草→乾燥後粉碎→過60目篩→室溫超聲提取→提取液→真空薄膜濃縮至體積減半→濃縮液→加2%活性炭室溫超聲波脫色2次→抽濾除去濾渣→脫色液→繼續真空薄膜濃縮至無醇味→上大孔樹脂Diaion HP-20柱→用水及乙醇混合溶劑梯度洗脫→分別收集洗脫液→將40%～60%乙醇洗脫液合併減壓濃縮至幹→幹浸膏樣品→檢測含量→成品。

　　三、討論

　　本實驗選用蘆丁作為對照品,因為蘆丁是黃酮化合物中比較有代表性的一種，其B環的3，4-鄰二酚羥基部位發生紫外吸收,可以通過測定蘆丁對照品的吸收度,從而求算供試品中總黃酮的含量。這是總黃酮含量測定實驗中比較經典的方法。

　　通過實驗證明，提取含羞草中總黃酮的最佳工藝為用10倍量的80%乙醇為溶劑超聲提取3次，10 min/次。

　　本實驗採用大孔吸附樹脂Diaion HP-20分離含羞草中的黃酮類成分，選擇不同濃度的乙醇溶液進行洗脫，得出40%乙醇溶液洗脫效果較好，總分離物得率達到43.48%，總黃酮含量達到87.38%。另外水洗脫部位得率較高，含少量黃酮，還含有較多的大極性化合物。在用大孔吸附樹脂分離含羞草總黃酮時，可先用水洗脫，除去大量的大極性化合物，減少影響，再用40%乙醇進行洗脫。

　　現代藥理研究表明，黃酮類化合物在心血管系統、內分泌系統和抗腫瘤方面具有明顯的藥理作用。含羞草總黃酮的藥理活性未見深入研究。本文利用大孔吸附樹脂分離純化含羞草總黃酮，為進一步研究含羞草總黃酮的藥理活性,更好地開發利用含羞草資源奠定了基礎。

　　參考文獻：

　　1、黃河勝. 黃酮類化合物藥理作用研究進展[J]. 中國中藥雜誌，2000,25***10***:499.

　　2、全國中草藥彙編編寫組.全國中草藥彙編[M].北京：人民衛生出版社，1975:464.

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