生物基因工程知識點

　　基因工程技術為基因的結構和功能的研究提供了有力的手段，下面小編給你分享，歡迎閱讀。

　　***一***

　　基因工程的基本工具

　　1.“分子運輸車”——載體

　　***1***載體具備的條件：①能在受體細胞中複製並穩定儲存。

　　②具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入。

　　③具有標記基因，供重組DNA的鑑定和選擇。

　　***2***最常用的載體是??質粒,它是一種裸露的、結構簡單的、獨立於細菌染色體之外，並具有自我複製能力的雙鏈環狀DNA分子。

　　***3***其它載體： 噬菌體的衍生物、動植物病毒

　　2.“分子手術刀”——限制性核酸內切酶***限制酶***

　　***1***來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。

　　***2***功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，並且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。

　　***3***結果：經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。

　　3.“分子縫合針”——DNA連線酶

　　***1***兩種DNA連線酶***E?coliDNA連線酶和T4-DNA連線酶***的比較：

　　①相同點：都縫合磷酸二酯鍵。

　　②區別：E?coliDNA連線酶來源於T4噬菌體，只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連線起來;而T4DNA連線酶能縫合兩種末端，但連線平末端的之間的效率較低。

　　***2***與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵。DNA連線酶是連線兩個DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。

　　***二***

　　基因工程的基本操作程式

　　第一步：目的基因的獲取

　　1.目的基因是指： 編碼蛋白質的結構基因 。

　　2.原核基因採取直接分離獲得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法_和化學合成法_。

　　3.PCR技術擴增目的基因

　　***1***原理：DNA雙鏈複製

　　***2***過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈;第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補DNA鏈;第三步：加熱至70～75℃，熱穩定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成。

　　第二步：基因表達載體的構建

　　1.目的：使目的基因在受體細胞中穩定存在，並且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發揮作用。

　　2.組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因

　　***1***啟動子：是一段有特殊結構的DNA片段，位於基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質。

　　***2***終止子：也是一段有特殊結構的DNA片段 ，位於基因的尾端。

　　***3***標記基因的作用：是為了鑑定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。常用的標記基因是抗生素基因。

　　第三步：將目的基因匯入受體細胞_

　　1.轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，並且在受體細胞內維持穩定和表達的過程。

　　2.常用的轉化方法：

　　將目的基因匯入植物細胞：採用最多的方法是 農桿菌轉化法，其次還有 基因槍法和 花粉管通道法等。

　　將目的基因匯入動物細胞：最常用的方法是 顯微注射技術。此方法的受體細胞多是 受精卵。

　　將目的基因匯入微生物細胞：原核生物作為受體細胞的原因是 繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少 ，最常用的原核細胞是 大腸桿菌 ，其轉化方法是：先用 Ca2+ 處理細胞，使其成為 感受態細胞 ，再將 重組表達載體DNA分子 溶於緩衝液中與感受態細胞混合，在一定的溫度下促進感受態細胞吸收DNA分子，完成轉化過程。

　　3.重組細胞匯入受體細胞後，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據是標記基因是否表達。

　　第四步：目的基因的檢測和表達

　　1.首先要檢測 轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是採用 DNA分子雜交技術。

　　2.其次還要檢測 目的基因是否轉錄出了mRNA，方法是採用 用標記的目的基因作探針與 mRNA雜交。

　　3.最後檢測 目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取 蛋白質，用相應的 抗體進行抗原-抗體雜交。

　　4.有時還需進行 個體生物學水平的鑑定。如 轉基因抗蟲植物是否出現抗蟲性狀。

　　***三***

　　蛋白質工程的概念

　　蛋白質工程是指以蛋白質分子的結構規律及其生物功能的關係作為基礎，通過基因修飾或基因合成，對現有蛋白質進行改造，或製造一種新的蛋白質，以滿足人類的生產和生活的需求。***基因工程在原則上只能生產自然界已存在的蛋白質***

　　***四***

　　基因工程的應用

　　1.植物基因工程：抗蟲、抗病、抗逆轉基因植物，利用轉基因改良植物的品質。

　　2.動物基因工程：提高動物生長速度、改善畜產品品質、用轉基因動物生產藥物。

　　3.基因治療：把正常的外源基因匯入病人體內，使該基因表達產物發揮作用。