探究溫腎調經顆粒質量標準

　　溫腎調經顆粒主要由當歸、杜仲、菟絲子、肉蓯蓉、茜草等藥物組成，其處方來源於臨床驗方，具有溫腎養血，利溫化濁，祛瘀調經之功效，臨床上用於腎陽不足，衝任血虛，溼濁瘀阻所致之月經後期，經量稀少，甚或經閉不通的治療，效果顯著，是我國在多囊卵巢綜合徵研究領域惟一進入臨床階段研究的中藥製劑。本研究對其質量標準進行了定性和定量研究，制定了肉蓯蓉、菟絲子、茜草的薄層色譜定性鑑別，並建立了製劑中阿魏酸的高效液相色譜含量測定方法。

　　1.儀器與試藥

　　島津SCL-10AVP液相色譜儀***日本***，SPD-10AVP檢測器，Class-VP工作站，KQ3200DE型醫用超聲波清洗器***崑山市超聲儀器有限公司***;優普超純水機UP-Ⅱ-10T***成都超純科技有限公司***;1/萬及1/10萬電子天平***北京賽多利斯儀器系統有限公司***。溫腎調經顆粒***自制***;毛蕊花糖苷對照品***中國藥品生物製品鑑定所，批號1530-200202***;菟絲子對照藥材***中國藥品生物製品鑑定所，批號21232-200401***;茜草對照藥材***中國藥品生物製品鑑定所，121049-0301***;阿魏酸對照品***中國藥品生物製品鑑定所，100834-200701***;矽膠G***薄層色譜用，青島海洋化工廠***;甲醇為色譜純，水為自制二次重蒸水，其他試劑均為分析純。

　　2.方法與結果

　　2.1定性鑑別

　　2.1.1肉蓯蓉的薄層色譜鑑別取本品10g，加甲醇50ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸乾，殘渣加無水乙醇1～2ml使溶解，作為供試品溶液。另取麥角甾苷對照品，加乙醇製成每1ml含2.5mg的溶液。另取不含肉蓯蓉的樣品同法制成陰性對照液。照薄層色譜法***《中國藥典》[1]2010年版一部附錄Ⅵ B***試驗，吸取上述3種溶液各10μl，分別點於同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-9%醋酸***20:3:2***為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以5% FeCl3乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照溶液無干擾。

　　2.1.2菟絲子的薄層色譜鑑別取本品5g，加甲醇60ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸乾，殘渣加無水乙醇溶解，濾過，濾液濃縮至1～2ml，作為供試品溶液。另取菟絲子對照藥材1g，研碎，加甲醇20ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸乾，殘渣加無水乙醇溶解，濾過，濾液濃縮至1～2ml，作為對照藥材溶液。再取菟絲子陰性樣品同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法***《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B***試驗，吸取上述3種溶液各10μl，分別點於同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇***5:5:3***為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈***254nm***下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照溶液無干擾。

　　2.1.3茜草的薄層鑑別取本品10g，加甲醇50 ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸乾，殘渣加氯仿溶解，濾過，濾液濃縮至1～2 ml，作為供試品溶液。另取茜草對照藥材1g，研碎，加甲醇10ml，超聲處理30min，同法制成對照藥材溶液。再取茜草陰性樣品同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法***《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B***試驗，吸取上述3種溶液各10μl，分別點於同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以石油醚***60～90℃***-丙酮***4:1***為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈***254nm***下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照溶液無干擾。

　　2.2阿魏酸的含量測定

　　2.2.1色譜條件Kromasil C18柱***250mm×4.6mm，5μm***;流動相為甲醇-5%醋酸***20:80***;流速為1.0ml/min;檢測波長323nm，柱溫35℃。

　　2.2.2對照品溶液的製備取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇:5%醋酸***1:4***的溶液製成每1ml含阿魏酸10μg的溶液，即得。

　　2.2.3供試品溶液的製備取本品適量，研細，取1.4g ，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇:5%醋酸***1:4***混合溶液25ml，稱重，超聲處理***功率160W，頻率50kHz***40min，放冷，再稱重，用以上溶劑補充減失的重量，濾過，取續濾液經微孔濾膜***0.45μm***，即得。

　　2.2.4陰性對照溶液製備按處方比例稱取除當歸和川芎以外的藥材，按製備工藝製成缺當歸和川芎的陰性樣品，按上述供試品溶液的製備方法制成陰性對照溶液。

　　2.2.5專屬性試驗分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性對照溶液各20μl，注入液相色譜儀，結果表明，陰性對照品溶液在對照品、供試品溶液相對保留時間處無干擾峰出現，本研究方法可行。色譜峰見圖1。

　　2.2.6 線性範圍考察精密稱取阿魏酸對照品適量,加甲醇:5%醋酸***1:4***混合溶劑製成每1ml含50μg的對照品溶液，分別精密吸取該溶液0.5、1.0、1.5、2.0、4.0ml置10ml量瓶中，用上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，分別吸取20μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，計算，以峰面積對濃度迴歸，得迴歸方程Y=118234X+3026.98 r=0.9999，結果表明：阿魏酸在2.50～20.00μg/ml濃度範圍內呈良好的線性關係。

　　2.2.7精密度試驗精密吸取阿魏酸對照品溶液,連續進樣5次，每次20μl，計算峰面積的相對標準偏差RSD1.4%，表明本法精密度良好。

　　2.2.8重複性試驗製備供試品溶液5份，分別進樣，每次20μl，測定阿魏酸平均質量分數為0.1205mg/g, RSD 0.56%,結果表明本法重複性好。

　　2.2.9穩定性試驗對同一供試品溶液每隔3h進樣1次，每次20μl，共4次，依法測定，結果阿魏酸峰面積RSD 0.41%，表明供試品溶液在9h內穩定。 A對照品;B 陰性對照;C.供試品

　　2.2.10加樣回收率試驗取已知含量樣品粉末0.7g，精密稱定，精密加入一定量阿魏酸對照品，按照擬定的方法測定，計算回收率，結果見表1。表1阿魏酸加樣回收率試驗***n=5***

　　2.2.11樣品測定分別取不同批號的樣品1.4g，精密稱定，按供試品溶液製備方法制備供試品溶液，進樣20μl，計算供試品含量，結果3批溫腎調經顆粒中阿魏酸含量分別為0.1205、0.1221、0.1235 mg/g。

　　3.討論

　　肉蓯蓉、菟絲子、茜草為本品中主要的3味藥，本研究參考文獻[2],建立了以上3味藥材的TLC鑑別方法，結果表明所建立的方法展開系統分離效果好，斑點清晰，專屬性強，陰性無干擾。本品為中藥複方製劑，成分比較複雜，處方中當歸為君藥，故選定其活性成分阿魏酸作為定量檢測指標，建立了HPLC含量測定方法、方法學研究表明該法具有簡便、靈敏、重現性好的特點，可以用於本品的質量控制方法。