基因工程的操作步驟 ?

General 更新 2024-11-26

基因工程的操作步驟

工具（1）酶：限制性核酸內切酶、DNA連線酶、（2）載體：質粒載體、噬菌體載體、Ti質粒、人工染色體1.提取目的基因獲取目的基因是實施基因工程的第一步。如植物的抗病（抗病毒抗細菌）基因，種子的貯藏蛋白的基因，以及人的胰島素基因干擾素基因等，都是目的基因。要從浩瀚的“基因海洋”中獲得特定的目的基因，是十分不易的。科學家們經過不懈地探索，想出了許多辦法，其中主要有兩條途徑：一條是從供體細胞的DNA中直接分離基因；另一條是人工合成基因。直接分離基因最常用的方法是“鳥槍法”，又叫“散彈射擊法”。鳥槍法的具體做法是：用限制酶將供體細胞中的DNA切成許多片段，將這些片段分別載入運載體，然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞，讓供體細胞提供的DNA（即外源DNA）的所有片段分別在各個受體細胞中大量複製（在遺傳學中叫做擴增，如使用PCR技術），從中找出含有目的基因的細胞，再用一定的方法把帶有目的基因的DNA片段分離出來。如許多抗蟲抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。用鳥槍法獲得目的基因的優點是操作簡便，缺點是工作量大，具有一定的盲目性。又由於真核細胞的基因含有不表達的DNA片段，一般使用人工合成的方法。人工合成基因的方法主要有兩條。一條途徑是以目的基因轉錄成的信使RNA為模版，反轉錄成互補的單鏈DNA，然後在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需要的基因。另一條途徑是根據已知的蛋白質的氨基酸序列，推測出相應的信使RNA序列，然後按照鹼基互補配對的原則，推測出它的基因的核苷酸序列，再通過化學方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。如人的血紅蛋白基因胰島素基因等就可以通過人工合成基因的方法獲得。2.目的基因與運載體結合基因表達載體的構建（即目的基因與運載體結合）是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。將目的基因與運載體結合的過程，實際上是不同來源的DNA重新組合的過程。如果以質粒作為運載體，首先要用一定的限制酶切割質粒，使質粒出現一個缺口，露出黏性末端。然後用同一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端（部分限制性內切酶可切割出平末端，擁有相同效果）。將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處，首先鹼基互補配對結合，兩個黏性末端吻合在一起，鹼基之間形成氫鍵，再加入適量DNA連線酶，催化兩條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脫氧核糖核酸連線起來，形成一個重組DNA分子。如人的胰島素基因就是通過這種方法與大腸桿菌中的質粒DNA分子結合，形成重組DNA分子（也叫重組質粒）的。3.將目的基因匯入受體細胞將目的基因匯入受體細胞是實施基因工程的第三步。目的基因的片段與運載體在生物體外連線形成重組DNA分子後，下一步是將重組DNA分子引入受體細胞中進行擴增。基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌，枯草桿菌，土壤農桿菌，酵母菌和動植物細胞等。用人工方法使體外重組的DNA分子轉移到受體細胞，主要是借鑑細菌或病毒侵染細胞的途徑。例如，如果運載體是質粒，受體細胞是細菌，一般是將細菌用氯化鈣處理，以增大細菌細胞壁的通透性，使含有目的基因的重組質粒進入受體細胞。目的基因匯入受體細胞後，就可以隨著受體細胞的繁殖而複製，由於細菌的繁殖速度非常快，在很短的時間內就能夠獲得大量的目的基因。4.目的基因的檢測和表達目的基因匯入受體細胞後，是否可以穩定維持和表達其遺傳特性，只有通過檢測與鑑定才能知道。這是基因工程的第四步工作。以上步驟完成後，在全部的受體細胞中，真正能夠攝入重組DNA分子的受體細胞是很少的。因此，必須通過一定的手段對受體細胞中是否匯入了目的基因進行檢測。檢測的方法有很多種，例如，大腸桿菌......

基因工程操作過程的主要步驟有哪些

一，目的基因的獲取。二，基因表達載體的構建。三，匯入受體細胞。四，目的基因的檢測與鑑定。

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基因工程包括哪些步驟

基因工程包括"四步曲"：

第一、提取目的基因；

第二、目的基因與運載體結合；

第三、將目的基因匯入受體細胞；

第四、目的基因的檢測和表達。

什麼是基因工程？它包括哪些主要步驟

基因工程（genetic engineering）又稱基因拼接技術和DNA重組技術，是以分子遺傳學為理論基礎，以分子生物學和微生物學的現代方法為手段，將不同來源的基因按預先設計的藍圖，在體外構建雜種DNA分子，然後匯入活細胞，以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、生產新產品。第一步，獲取目的基因。第二步，目的基因與運載體結合。第三步，將目的基因匯入受體細胞。第四步，目的基因的檢測與鑑定。

基因工程基本操作流程

1.目的基因分離或合成

2.通過體外重組將基因插入載體

3.將重組DNA匯入細胞

4.擴曾克隆的基因

5.篩選重組體克隆