革蘭氏染色的注意事項?

General 更新 2024-11-22

什麼是革蘭氏染色法？染色過程應注意什麼

革蘭氏染色最常用的細菌鑑別染色法之一。未經染色之細菌，由於其與周圍環境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察。染色後細菌與環境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵，而用以分類鑑定。革蘭氏染色屬復染法，即將標本固定後，先用龍膽紫染色，加碘液媒染後用酒精脫色，再用稀釋復紅復染。染色後除可以看到細菌形態外，還可將細菌分為兩大類，即不被酒精脫色而保留紫色者為革蘭氏陽性菌（G+）。被酒精脫色復染成紅色者為革蘭氏陰性菌（G-）。革蘭氏染色原理尚不肯定，可能與細菌所帶核糖核酸、細菌壁結構通透性、等電點等因素有關。致病菌如金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、碳疽桿菌等屬革蘭氏染色陽性菌。百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等均屬革蘭氏陰性。所以根據細菌的革蘭氏染色性質，可以縮小鑑定範圍，有利於進一步分離鑑定，以對疾病做出診斷。又由於各種抗生素的抗菌譜不同，革蘭氏染色尚可做為選用抗生素的參考。

微生物進行革蘭氏染色時應注意哪些事項?

1.選用活躍生長期菌種染色，老齡的革蘭氏陽性細菌會被染成紅色而造成假陰性。 2.塗片不宜過厚，以免脫色不完全造成假陽性。 3.脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵，脫色不夠造成假陽性，脫色過度造成假陰性。

微生物染色的革蘭氏染色要點

1、待檢菌菌齡應為18-24小時。一般情況下，革蘭氏陰性菌的染色反應較為穩定，不易受菌齡的長短影響；而革蘭氏陽性菌，有的在幼齡時呈陽性，超過24小時可變為陰性。故培養物越陳舊，菌細胞衰老、死亡，則染色常為陰性，造成錯判。2、塗片以勻薄為佳，切不可濃厚。過於密集的菌體，因洗脫不勻常呈假陽性。鏡檢革蘭氏染色反應時，要以分散開的細菌著色為準。塗片後不宜用火焰烤乾，宜自然乾燥；若經火焰固定時，應以不燙手為度，以免菌體受損，致使染色反應不準。3、革蘭染色操作的關鍵步驟是對脫色的掌握，脫色時間不足，革蘭氏陰性菌可染成陽性菌；脫色過度，革蘭陽性菌會染成陰性菌。故應注意掌握，以無紫色脫出時立即水洗。脫色時間按塗沫厚薄、塗片含水量多少適當掌握，塗沫厚、塗片含水少（水洗後瀝乾水分）時，脫色時間稍長；塗沫薄、塗片含水量多（未瀝乾）時，脫色時間稍短，在20-30秒內調整。4、碘液配製後，應裝在密閉的暗色瓶內儲存。如因儲存不當，部分碘將被揮發或被還原，試液由原來的紅棕色變為淡黃色，以至影響固定甲紫的作用，故不宜再用。5、革蘭氏染色能否獲得滿意的結果，與操作者的經驗有很大關係。操作沒有把握或對染液有懷疑時，應以對照菌同時染色。