現代高效液相色譜中，分離效果好壞很大程度上取決於色譜填料的選擇中。但是色譜填料的選擇範圍很寬，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解.
工具/原料
HPLC
色譜柱
方法/步驟
瞭解硅膠基質填料:
1、正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica），以及其他具有極性官能團，如胺基團(ZH2,APS)和氰基團（CN，CPS）的鍵合相填料。
由於硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他團的極性教強，因此，分離的次序是依據樣品中的各組份的極性大小，即極性強落的組份最先被沖洗出色譜柱。
正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如：正乙烷（Hexane）,氯（Chloroform）二氯甲烷（Methylence Chloride）等.
2、反相色譜
反相色譜填料常是以硅膠為基礎，表面鍵合有極性相對教弱的官能團的鍵合相。
反相色譜所使用的流動相極性教強，通常為水，緩衝液與甲醇，已腈等混合物。
樣品流出色譜柱的順序是極性教強組合最先被衝出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。
常用的反相填料有C18（ODS） C8（MOS）。C4（B）C6H5（Phenyl）等。
聚合物填料：
聚合物調料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸至等，其主要優點是在PG值為1-14均可使用。
相對與硅膠基質的C18填料，這類填料具有更強的淑水性；大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。
現在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料，色譜柱柱效教低。
其他無機填料
其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化。由於其特殊的性質，一般僅限於特殊的用途。如墨化碳也用於正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎，不再需其它的表面改性，該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強，石墨化碳可用於分離某些幾何導構體，又由於HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用於HPLC，氧化鋁微粒剛性強，可製成穩定的色譜柱柱床，其優點是可在PH高達12的流動相中使用。但由於氧化鋁與鹼性化合物作用也很強，應用範圍受到一定的限制，所以未能廣泛應用，新型氧化誥填料也可用於 HPLC，商品化的僅有聚合物塗層的多孔氧化誥微球色譜柱，應用PH範圍1~14，溫度可達到1000C。由於氧化誥填料幾年才開始研究，加之前的實驗難度，其重要用途與優勢尚在進行中。
怎樣選擇填料粒度
目前，商品化的色譜料粒度從1um到超過30um均有銷售，而目前分析分離主要用3,5和10um填料，填料的粒度主要影響填充柱的兩個參數，即柱效和背壓。粒度越小，填充柱的柱效越高；小於3um的填料應用，在相同選擇性條件下，提高柱效可提高分離度，但不是唯一的因素。如果固定相選擇是真確，但是分離度不夠，那麼選擇更小粒度的填料是很用有的，3um填料填充柱的柱數比相同條件下的5UM填料的柱效提高近30%；然而；3um的色相譜的背壓卻是5um的2倍。與此同時，柱效提高意味著在相同條件下可以選擇更短的色譜柱，以縮短分析時間，另外，可以採用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使用溫度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色譜柱的壓力。
如何保證良好的柱性能與柱壽命
認證閱讀色譜柱使用說明書
使用填充良好的色譜柱
儘量減少壓力波動，避免機械及熱衝擊
使用保護柱及在線過濾器
經常以強溶劑沖洗色譜柱
充分過濾樣品及流動相，儘量避免雜質微粒與保強留分成
用穩定的固定相（C18最穩定）
在中等PH紙操作（6~8），用有機年成液溶
色譜柱使用溫度最好小於400C
硅膠基質的的色譜柱，應保持流動相的PH值範圍在3.0~8.0
在水流動相與緩衝濃液中加200ppm的疊氮鈉
流動相中含有緩衝溶液，應注意應95∶5的水及有機溶劑過渡，有機溶劑不能低於5%
過夜或儲存時，沖洗掉鹽和緩衝液，用純有機溶劑流動相保存（乙晴最好）
注意事項
瞭解原理