1試驗材料
試驗于山東農業大學園藝科學與工程學院中心實驗室、花卉栽培生理實驗室以及山東農業大學南校區園藝站進行。供試材料為栽植3年的美國紅楓（Acerpalmatum）。
1.1試驗設計
1.1美國紅楓葉片色素成分分離鑑定及花色素苷的穩定性
2009年5月，選晴天上午9:00~10:00採集枝條中部葉片，採後立即放入冰盒儲存。用自來水沖洗葉片3~4次，然後用蒸餾水沖洗，晾乾；去葉柄及葉脈後剪碎混勻，備用。
1.2溫光互作對美國紅楓葉片熒光引數和抗氧化酶活性的影響
於2009年4月取長勢一致，生長健壯的美國紅楓枝條，用蒸餾水沖洗乾淨，放入裝有hogland營養液的水桶中，每桶放10支，每處理3次重複，共15桶。分別放入不同溫度和光照的光照培養箱中：高溫強光（I）：35℃和1200μmol·m-2·s-1；低溫強光（II）：10℃和1200μmol·m-2·s-1；低溫弱光（III）：10℃和100μmol·m-2·s-1；高溫弱光（IV）：35℃和100μmol·m-2·s-1。
1.3高溫強光下緩衝溶液及Fe
2+溶液對美國紅楓葉片光合作用及葉片內抗氧化酶活性的影響
2009年8月選株高及生長狀況大致相同，生長健壯的植株將此次試驗分為四組：
T1對照（噴施蒸餾水）；
T2葉面噴施pH5.4緩衝溶液；
T3葉面噴施鐵肥（10mmol/L）；
T4葉面噴施pH5.4緩衝溶液與Fe2+（10mmol·L-1）溶液；
每天傍晚噴施一次，溶液均勻噴灑於葉片正、背面，以形成可見的液珠為度。處理2d後開始取材，此後每天取材一次，連續6次。
2測定內容與方法
2.1葉片色素成分定性測定
美國紅楓葉片色素型別的定性分析：取葉片（幼葉）0.1g，分別加石油醚、10%HCl、30%氨水約5ml，迅速研磨成勻漿，過濾，觀察顏色。
美國紅楓葉片類黃酮顯色反應：
（1）濃鹽酸--鎂粉反應：加入鎂粉少量，然後加入濃鹽酸5滴，搖勻，靜置1h；
（2）濃鹽酸--鋅粉反應：加入鋅粉少量，然後加入濃鹽酸10滴，搖勻，靜置1h；
（3）醋酸鉛反應：加2.0%Pb（CH3COO）·3H2O2ml，搖勻，靜置2h；
（4）三氯化鐵反應：加5.0%FeCl3·6H2O2ml；
（5）三氯化鋁反應：加2.0%AlCl3·6H2O甲醇溶液1ml；
（6）濃硫酸反應：加2.5ml濃H2SO4，搖勻，再置沸水浴5min；
（7）鹼性試劑反應：加5%Na2CO33ml，搖勻，密閉靜置30min，通空氣10min；
（8）氨性氯化鍶反應：取甲醇10ml，加氨水定容至25ml，成為被氨水飽和的甲醇溶液；對樣品液加0.01mol/LSrCl2·6H2O甲醇液10滴，再加被氨水飽和的甲醇液10滴，搖勻，靜置1h；
（9）硼酸反應：加2.0%H2O2C4·2H2O10滴，再加2.0%H3BO33ml。
2.2花色素苷、葉綠素含量測定
花色素苷將葉片洗淨，擦乾，剪碎。用2.5mol/LHCl：95%乙醇=15：85（V/V）混合液，在黑暗條件下浸提24h後用島津UV-2450紫外可見分光光度計檢測535nm波長的光密度值，按公式（胡位榮等，2004）計算花色素苷的含量。葉綠素採用80%丙酮提取，比色法測定（趙世傑，1998）：取新鮮葉片，避開大葉脈，用面積為13.25px2的打孔器打取葉圓片10個，加80%丙酮20ml，置於暗處浸提24~48h，直到葉片發白，於663nm、646nm、470nm下比色，按公式計算Chla、Chlb和Car含量。
2.3 PAL酶活性測定
根據張春妮等（2005）的方法有所改動。酶液的製備：稱取0.3g葉片，加入0.05gPVP，再加0.2mol·L-1硼酸緩衝液（pH8.8）5ml，冰浴中研磨勻漿，在4℃下1000r·min-1，離心15min，上清液用作酶活性測定。酶活性測定：取1ml0.02mol·L-1苯丙氨酸，加入2ml0.05mol·L-1硼酸鹽緩衝液（pH8.8）和0.5ml酶提取液，對照用0.5ml0.2mol·L-1硼酸鹽緩衝液（PH8.8）代替酶提取液。於30℃水浴保溫30min，用U-1800紫外分光光度計測定290nm處的吸光度，酶活性單位定義為每克鮮重每小時吸光度的變化（△AOD290·h-l·g-1FW）。
2.4淨光合速率測定
選擇並標記植株上完好的功能葉，用Ciras-1型行動式光合儀（英國）直接測定淨光合速率（Pn）。
2.5熒光引數測定
用FMS-2型調製式熒光儀（英國Hansatech產）測定各項熒光引數，測定葉片的部位與光合作用的測定部位相同，測定前先暗適應30min，測定時調整葉片使其受光量儘量一致，以減少誤差。測定暗適應下最大熒光（Fm）、可變熒光（Fv）、初始熒光（Fo）。各引數的意義及光化學效率計算參照Demming-Adams等（1992）及FMS-2型葉綠素熒光儀使用手冊，公式如下：PSⅡ最大光化學效率（Fv/Fm）=（Fm-Fo）/Fm。
2.6葉黃素迴圈測定
用打孔器取2個葉圓片（50px2），用高效液相色譜儀按照Cheng（2003）的方法分析測定葉黃素迴圈各組分紫黃質（V）、單環氧玉米黃質（A）、玉米黃質（Z）含量以（A+Z）/（A+Z+V）表示脫環氧化狀態。各項指標的測定均重複5次。測定處理0、5d的葉黃素迴圈的變化情況。
2.7 SOD、POD、CAT活性，MDA和可溶性蛋白含量的測定
稱取葉片0.5g，於研鉢中加5mlpH7.8的50mmol·L-1磷酸緩衝液，冰浴研磨，0～4℃下10000rpm離心15min，上清夜即為酶提取液。供酶活性、MDA含量和可溶性蛋白含量測定。SOD活性用NBT還原法（Giannopolitis，1977）：3ml反應液（內含2.7ml144mmol·l-1的蛋氨酸，0.1ml22.5μmol·L-1氮藍四唑，0.1ml3μmol·L-1的EDTA-Na2，0.1ml60μmol·L-1的核黃素）加入20μL酶提取液，60μmol·m-2·s-1左右光照下反應30min，於560nm比色，以抑制NBT光化還原的50%為一個酶活性單位。
POD活性採用愈創木酚法（Omran，1980）：3ml反應液（其中H2O2的濃度為0.1mol·L-1，愈創木酚濃度為3.5mmol·L-1，用0.1mol·L-1pH6.0的磷酸緩衝液配製）中加入20μl酶提取液，紫外分光光度計馬上讀OD470值，每隔一分鐘讀一次，讀反應前2min的OD值，活性△OD470·min-1·g-1FW表示。CAT活性用Chance等方法測定（Chance等，1995），3ml反應液（0.01mol·L-1pH7.0的磷酸緩衝液20ml中加入0.1mol·L-1的H2O25ml）中加入100μL酶液，立即讀取OD240值，每隔1min讀一次，讀反應前2min的OD值，活性以△OD240·min-1·g-1FW表示。
MDA含量測定用硫代巴比妥酸法（趙世傑等，1998）：取酶提取液1ml，加2ml0.67%的TBA溶液，沸水浴15min，4000rpm離心20min，於600nm，532nm，450nm下比色。MDA含量以μmol·g-1FW表示。可溶性蛋白含量的測定採用考馬斯亮藍比色法（趙世傑，1998）。取上清液20μL（對照加20μL水），加3ml考馬斯亮藍（100mg考馬斯亮藍，溶於50ml95%的乙醇，加85%的磷酸100ml，定溶至1000ml），放置2min馬上於595nm下比色。可溶性蛋白含量以mg·g-1FW表示。2.8可溶性糖含量的測定可溶性糖的測定採用蒽酮比色法。0.3g鮮樣加10ml蒸餾水，封口沸水浴30min（2次），濾紙漏斗過濾入50ml容量瓶中，沖洗殘渣，定容。吸提取液1ml，加蒸餾水1ml（對照加2ml蒸餾水），加蒽酮乙酸乙酯液（稱1g蒽酮溶於50ml乙酸乙酯中）0.5ml，加濃硫酸5ml，振盪，沸水浴1min，自然冷卻後，於630nm下比色（李合生等，2001）。
3資料與分析
採用Excel軟體處理資料、製圖，採用DPS軟體進行相關性分析。