細胞凋亡是細胞的生長的重要階段,它在機體的胚胎髮育、組織修復等方面具有十分重要的作用。正常細胞中,磷脂醯絲氨酸只分布在細胞膜脂質雙層的內側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂醯絲氨酸由脂膜內側翻向外側。AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca依賴性磷脂結合蛋白,能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS高親和力特異性結合。

Annexin V的簡介

分子量:35-36kD,它是一種Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的磷脂醯絲氨酸高親和力特異性結合。

FITC Annexin V 的簡介

經常用標記了FITC的AnnexinⅤ作為熒光探針,採流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測細胞凋亡的發生。

檢測原理:正常細胞和早期凋亡細胞的細胞膜是完整的。PI是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但在凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI能夠透過細胞膜與細胞核結合呈現紅色。將AnnexinⅤ與PI匹配使用,可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區分開來。

操作步驟:

用冷的PBS洗2次,然後用1x的結合液重懸細胞(1*10^6cells/mL);

將100ul溶液(1*10^5cells)轉移至5mL的離心管中。

加5ul的FITC Annexin V和PI各5ul。

輕輕渦旋細胞,避光,室溫孵育15min。

加400ul/tube 1X的結合液,流式分析1h。

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