常規切片的製作過程?

將各種方法(活檢、屍檢)獲取的組織標本經過一定的步驟處理,做成切片。蘇木素是鹼性染料,可將細胞核(嗜鹼性物質)染成藍色,伊紅是酸性染料,可將多數細胞的細胞質(嗜酸性物質)染成紅色,形成色彩鮮豔、結構清晰的組織影象。

工具/原料

1.屍檢來源的正常肺組織。

2. 器材 手術刀、恆溫箱、石蠟切片機、顯微鏡。

3. 試劑 10%福爾馬林,梯度酒精(70%、80%、90%、95%),無水酒精,二甲苯,包埋石蠟,蘇木素染液,伊紅染液。

方法/步驟

1. 取材和固定 用鋒銳的手術刀細緻而迅速地取下一塊大小適宜(1.5×1.5×0.2 cm)的肺組織塊,立即投入10%福爾馬林內固定24 h,也可多放一段時間待用時取出(最好不要超過48h)。

2. 脫水 依次經過70%(2 h)、80%(2 h)、90%(2 h)、95%酒精(Ⅰ、Ⅱ 各2 h)和無水酒精(Ⅰ、Ⅱ各1 h)脫水,二甲苯透明(Ⅰ、Ⅱ 各1 h),以置換組織內的酒精溶液。

3. 包埋 將透明好的組織塊置入已在溫箱(58℃~60℃)內熔化的石蠟內(Ⅰ、Ⅱ 各2 h),使石蠟浸入組織並替換出二甲苯。在包埋器的內壁塗一層甘油,傾入熔化的石蠟,將浸透蠟的組織塊放入包埋器(待切面朝下),擺好間距和方位,待蠟液表面凝固後,將包埋器投入冷水浴中,使石蠟冷卻凝固。

4. 切片 將蠟塊固定於切片機,切成5μm厚的切片,在45℃的水面上展平後撈在塗有防脫劑的載玻片上,置60℃烤箱2h。

5. 脫蠟 二甲苯脫蠟(Ⅰ、Ⅱ 各15min),不同濃度酒精(100%、95%、80%、70%)置換二甲苯並經蒸餾水水化後即可進行染色。

6. 蘇木精-伊紅染色 將經處理的組織切片置蘇木素染液中染5min,自來水沖洗,稀鹽酸分化後,置流水中充分沖洗返藍;伊紅染液染色2~3min,流水沖洗乾淨。

7. 脫水、透明和封固 染好的切片經梯度酒精脫水(70%、80%、95%、100%)各5min,二甲苯透明(Ⅰ、Ⅱ 各5 min),在載玻片上加一滴中性樹膠,然後覆蓋一片清潔的蓋玻片。

8. 顯微鏡觀察。

注意事項

1. 每取完一例標本後,所有的工具如刀、剪、盤、鑷、切板等,必須用水沖洗乾淨,以免汙染。

2. 儘量保持組織的原有形態,勿使組織塊受擠壓,切取標本的大小不超過2.0 cm×2.0 cm×0.2 cm。

3. 依據組織塊大小確定脫水、透明和浸蠟時間。時間過長,組織塊過硬、變脆;時間不夠,則組織塊硬度不夠,且HE染色時核漿藍染,界限不清,不利於觀察。

4. 蘇木素染後應充分返藍,使細胞色彩鮮明,結構清晰。

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