飼養細胞的方法

　　在體外的細胞培養中，單個的或數量很少的細胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖，加入的細胞稱之為飼養細胞。下面是小編精心為你整理的，一起來看看。

　　嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘乾。

　　不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套。

　　有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測。

　　水浴鍋很髒，生化培養箱要是得手動加溼的話盤裡的水也會很髒，勤換滅菌水加進去。

　　晚上離開的時候最好給細胞房照紫外，超淨臺是用完就開吧。

　　最好的是同一時間就你一個人在用細胞房在養細胞。

　　飼養細胞的製備

　　小鼠腹腔細胞含有巨噬細胞，除具有飼養作用外，還可清除死亡破碎細胞及微生物。取8～10周齡同系小鼠，斷頸處死後，無菌操作腹腔內注射10～15ml完全培養液，用消毒拇指輕揉腹部數次後， 吸回腹腔液體，調整細胞濃度為1×105/ml。 一般一隻小鼠腹腔液可獲取細胞3～5×106，可供一次融合用。亦可取兩隻小鼠腹腔巨噬細胞混合使用。此外，同系小鼠脾細胞和胸腺細胞亦可作為飼養細胞。

　　選擇性培養 兩種親本細胞經PEG處理後，可形成多種細胞成分的混合體，包括未融合的遊離親本細胞、骨髓瘤細胞間的融合、免疫B細胞間的融合以及骨髓瘤細胞與免疫B細胞間融合的異核細胞，僅後者可形成雜交瘤，應予以篩選出來克隆培養。通常應用HAT培養液，其中含有次黃嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。

　　大多數實驗室在融合當天就加入HAT培養液，也可次日加入。一般在融合後7～14天內使用HAT培養液，然後改用HT培養液。融合後第2～3周進行換液，每次吸出培養孔舊液1/2換入新液，以後視克隆生長情況3～5天換液1次，連續2周。3～5天后未融合及自身融合的細胞逐漸死亡，1周左右可出現克隆，並不斷增殖，當集落>3mm或佈滿孔底1/2時即可取上清作抗體活性檢測，同時補加新鮮HT培養液。在一次較好的融合試驗中，約70～80%孔有克隆生長。所有生長克隆的孔都需要取培養上清液進行抗體活性檢測。培養3周後即可改用普通完全培養液。