基因克隆的基本步驟?

基因克隆的基本步驟有哪些

選擇目的基因,並設計相應引物；

用引物PCR擴增目的基因片段；

選擇合適（抗性標記、酶切位點等）的克隆載體（為了保真擴增）,並將PCR片段連接入克隆載體中；（一般用Taq酶的PCR產物在末尾會自帶一個A,可在Solution 1作用下與兩端各帶一個T的線性T載體直接相連）

將連接產物轉化入感受態大腸桿菌,使之在含有抗生素的培養基上生長擴增；

從大腸桿菌中提取質粒（即前面的連接產物）,酶切鑑定和測序鑑定均無誤後將目的基因片段切下並與新的表達載體連接,然後再次轉化入大腸桿菌中擴增,再提質粒,即得到想要的目的基因片段克隆.

整個基因克隆的過程包括哪些步驟

基因克隆是70年代發展起來的一項具有革命性的研究技術，可概括為∶分、切、連、轉、選。最終目的在於通過相應技術手段，將目的基因導入寄主細胞，在宿主細胞內目的基因被大量的複製。

基因克隆的步驟

不知道你說的到底是基因複製。還是克隆技術。

基因複製，也就是DNA的複製（基因是DNA上的鹼基片段）可以有體內的自我複製，還有體外的PCR擴增技術。

兩種複製利用的原理都一樣，都是利用鹼基互補配對的原理，然後將DNA雙鏈解旋，將鹼基配對，重新形成同樣的DNA

克隆技術，一般指的是動物細胞核移植，是一種無性繁殖。克隆這個詞是英語clone的諧音

意為拷貝複製。

動物是由受精卵的分裂、分化形成的，由於動物的細胞經過多次的的分化，失去了全能性，也就意味著，動物的細胞一般情況下不能形成其他的細胞，更不能直接培育成一個個體。

但是，通過很多的研究發現，動物細胞核具有全能性。因此，科學家將動物細胞的細胞核分離出來，移植到一個去核卵細胞內（由於卵細胞體積大，易操作，且細胞內的環境能夠充分的發展細胞核的全能型）然後將進過細胞核移植的卵細胞在實驗室培養一段時間，等能夠移植到受體雌性動物體內時，將其植入雌性受體內的子宮，等到雌性受體分娩出來時，這個由細胞核移植而產生的動物就叫做克隆動物，這種技術就叫做克隆技術。

基因克隆的常用方法有哪幾種

這是一套通用方法，簡單方便。利用目的基因篩選就要考慮各種情況，很麻煩：能否順利表達（克隆載體不表達，原核真核，修飾定位、輔因子等等）；是否便於篩選（抗生素篩選很方便，如果目的基因是酶、轉錄因子或結構蛋白，怎麼篩選？）；不能通用（每研究一種蛋白，就要換一種載體/宿主/篩選方法）...

定位克隆的基本步驟

獲得了眾多的候選cDNA後，通過篩選cDNA文庫或RACE等方法克隆全長基因。為確定其中的致病基因，需要逐個檢測它們在患病家系中的變化情況，並分析其功能。功能分析往往是定位克隆中的一個難點，因為不同的疾病有不同的特徵，也就需要用不同的功能檢測系統進行分析。常用的如細胞水平的正義或反義基因的表達後細胞形態和功能變化的研究，在腫瘤研究中檢測細胞形態和接觸抑制的變化，軟瓊脂生長能力的變化及裸鼠致瘤性分析等。更進一步的功能分析則包括個體水平的基因敲除實驗等。現在還發展出了一些與其它方法相結合的新思路，如與差減雜交相結合，篩選位於候選區域的差異表達基因，大大提高了獲得有價值基因的可能性。同時人類基因組計劃中轉錄圖譜〔15〕工作的開展，有很多EST已被精確定位於染色體的不同區帶上，可以直接進行功能研究。隨著研究的深入，越來越多的EST定位工作的完成，基因轉錄圖譜的不斷完善，我們完全可以直接跳過定位克隆的第二個步驟而直接進入功能鑑定和基因全長的克隆工作，這可能將是定位克隆中最快的方法。在分析分離手段不斷提高，人類基因組計劃緊鑼密鼓地實施的今天，各種新思路新方法層出不窮，定位克隆方法的週期也將不斷縮小，為人類最終克隆各種疾病基因提供了可能性。