如何檢測單增李斯特氏菌:[5]腸道致病菌檢測?

一、單增李斯特氏菌

單增李斯特氏菌,學名Listeria monocytogenes,一種革蘭氏陽性菌,是李斯特菌屬。李斯特菌屬(Listeria)共分為2個群, 7個種:第一群包括單核細胞增生性李斯特菌(L monocytogenes,LM)(亦稱產單核細胞李斯特菌)、伊氏李斯特菌(L ivanovii)(亦稱綿羊李斯特菌)、英諾克李斯特菌(L innocua)(亦稱無害李斯特菌)、韋氏李斯特菌(L welshimei)、塞氏李斯特菌(L seeligeri),第二群包括格氏李斯特菌(L grayi)和莫氏李斯特菌(L mulTayi)。其中,單增李斯特菌是唯一能引起疾病的人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病,感染後主要表現為敗血症、腦膜炎和單核細胞增多。

二、單增李斯特氏菌檢測方法

1.細菌培養法

該菌營養要求不高,兼性厭氧,最適在含有CO2的微需氧環境中生長,生長溫度範圍-1.5℃-45℃,最適溫度為30℃-37℃,能在普通冰箱冷藏室生長,是一種典型的耐冷性細菌,同時還具有耐鹽性。LM在普通瓊脂平板上呈細小直徑約0.2-0.4μm、半透明露水樣菌落。在血瓊脂平板上有β溶血環。在顯色培養基上呈藍綠色。

2.生化鑑定法

該菌主要生化特性如下:

①觸酶陽性;

②氧化酶陰性;

③發酵多種糖類;

④產酸不產氣;

⑤不發酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、側金盞花醇、棉子糖、衛矛醇和纖維二塘;

⑥不利用枸櫞酸鹽,40%膽汁不溶解;

⑦吲哚、硫化氫、尿素、明膠液化、硝酸鹽還原、賴氨酸、鳥氨酸均陰性;

⑧VP、甲基紅試驗和精氨酸水解試驗陽性;

⑨對鹼和鹽抵抗力強,60-70℃經5-20分鐘可殺死,70%酒精5min、2.5%石碳酸、2.5%氫氧化鈉、2.5%福爾馬林20min可殺死此菌。

⑩該菌對青黴素、氨苄青黴素、四環素、磺胺均敏感。

3.血清凝集法

根據菌體抗原和鞭毛抗原,LM分為16個血清型:1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c、4d、4e、5、6a、6b、7。抗原結構與毒力無關,對人致病的主要為血清型1/2a、1/2b、4b,佔全球本病病例約90%。

關於血清凝集法用的診斷血清方面,推薦天津生物芯片公司生產的單增李斯特氏菌全套診斷血清產品,該菌最常見的O:3,O:5,O:8和O:9型的診斷血清 被納入這套產品。

4.核酸擴增法

核酸擴增技術,即聚合酶鏈式反應(polymerase chainreaction,PCR),其基本原理是設計、合成兩條寡核苷酸,作為引物,對應於待測病原微生物某一段特異性序列的兩端,然後在體外模擬DNA體內複製的過程反覆擴增,使靶序列放大上萬倍甚至上百萬倍而被檢測出來。

單增李斯特氏菌的檢測,其特異性引物的設計,一種是依據它的基因組序列中的特異序列(16S或 16S/23S 間區的保守區域),一種是依據它的毒力基因序列(常用hlyA,iap等)。

如何檢測單增李斯特氏菌 (共1篇)

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