骨髓MSCs成骨和神經細胞誘導的操作方法?

骨髓間充質幹細胞成骨細胞及神經細胞的誘導分化具體的操作過程和操作方法：

成軟骨細胞的誘導

1.選前三代生長良好的MSCs，消化後製成單細胞懸液，以3X10"/ml的密度接種於細胞瓶中；

2.待細胞達到80-90%融合後，每隔三天換液一次，倒置顯微鏡下觀察；

3.14 天后終止誘導，提取總RNA，設計II型前膠元的引物序列；

4.COL(I I) 上游:5 ' -TTC AGC TAT GGA GAT GAC AAT C-3‘，下游:5’-AGA GTC CTA GAG TGA CTGAG-3 ，產物片斷4756p，進行RT-PCR擴增；

5.其產物經瓊脂糖凝膠電泳後觀察，檢測II型前膠元mRNA的表達；

6.軟骨細胞誘導液配置，DEME高糖培養液，10%胎牛血清，100u/ml青黴素，l00g/ml鏈黴素，TGF-P}10ng/ml，抗壞血酸50ug/mla。

體外誘導MSCs向神經細胞分化

1.取體外擴增至第2代的MScs；

2.以lx105/ml濃度接種於放置有消毒蓋玻片的6孔板內，製備細胞爬片；

3.1周後進行誘導:加10ng/1lllEGF+含10%FBs的培養液預誘導3d；

4.lm oFLBME+含10%FBS的培養液預誘導ld；

5.24h後加1nmol/mlJRA+含10%FBs的培養液進行誘導；

6.誘導24h後密切觀察，可見多數細胞形成明顯的神經元樣細胞形態，胞體呈圓形，突起較長，雙極或多極形，在突起末端出現分支，部分相鄰細胞的突起連線成網。