生物實驗:THP-1?

THP-1是人外周血的單核細胞系,最初來源於急性單核細胞性白血病患者。屬於懸浮細胞,適合用於轉染或感染實驗。其表面抗原HLA型為:A2,A9,B5,DRw1,DRw2。

生物實驗:THP-1 細胞培養

工具/原料

培養基:RPMI-1640 (Invitrogen #11875-093)

胎牛血清:Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO #10099-141)

二甲亞碸:DMSO (SIGMA D2650)

雙抗P/S (Penicillin/Streptomycin)(GIBCO #15140-122)

方法/步驟

細胞培養:THP-1細胞培養於含有10%FBS+1%P/S的RPMI-1640培養基中,培養環境為37℃,5%CO2。可以每隔3-4天加一些新鮮的培養基,或直接傳代。

細胞傳代:當細胞密度達到約8x10^5cells/ml左右時,即可進行傳代。由於是懸浮細胞,可直接將細胞吸出,離心之後傳代。傳代最少濃度不應少於1x10^5 cells/ml。

細胞凍存:取差不多1x10^7個細胞,用1ml含有10%DMSO的FBS重懸,轉入凍存管,於-80℃冰箱過夜。第二天移入液氮中長期儲存。

注意事項

細胞養不好,可能的原因有,THP-1細胞特別依賴細胞濃度,ATCC上10 5到106每ML,是一個很高的密度,細胞少了就不太容易養好。

細胞株的來源很重要,如直接來源於ATCC(American Type Culture Collection 美國模式菌種保藏中心)生命力要強於國內細胞庫的。

注意細胞的密度一定要高,介於5×105—— 106/ML之間,增值的快。細胞數量太少,不適合THP-1生長,一般狀態不好的THP-1在培養了3天后數量仍然不多,繼續培養一天或者兩天,培養基 嚴重泛黃,細胞數會增加。這一點不同於同是單核細胞系的U937細胞。

THP-1細胞適合在細胞Ph環境偏酸性環境生長,對培養基變化非常敏感,所以 儘量使用相同Ph的1640。

傳代後切忌常移出培養箱觀察,否則會影響細胞生長,狀態變差,一般首先表現為細胞內顆粒變多。一般THP-1 生長相當快,對於狀態已經不好的情況,建議傳代後3~4天再觀察,一般4天時間培養基已明顯泛黃,細胞數量巨增;1)THP-1細胞喜歡酸性條件,你不要老是換培養基。越酸的條件,細胞密度越大,細胞就長得越好;2)不要頻繁換液,一般2-3次換液離心一次(只是補充培養基)3) 使用1640(ATCC推薦),注意加碳酸氫鈉2.5g就可以了,寧酸勿鹼; 4)注意凍存的時候密度大些,推薦用血清凍存。

復甦比較慢,建議開始用小瓶,不要用一次性的。

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