操作白介素ELISA試劑盒實驗的過程?

白介素ELISA試劑盒用於測定人血清、血漿及相關液體樣本含量。應用雙抗體夾心法測定標本水平。用純化的抗體包被微孔板,製成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入,再與HRP標記的抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物,經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度,通過標準曲線計算樣品濃度。

工具/原料

聚苯乙烯塑料板(也就是酶標板)40孔或96孔、ELISA檢測儀、50μl及100μl加樣器、塑料滴頭、小毛巾、洗滌瓶。

2. 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。

操作過程

標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在上海恆遠生物白介素ELISA試劑盒酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加於酶標板孔底部,儘量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘。

配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用

洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重複5次,拍幹。

加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

溫育:操作同3。

洗滌:操作同5。

顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震盪混勻,37℃避光顯色15分鐘.

終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行。

計算方法

以標準物的濃度為橫座標,OD值為縱座標,在座標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中儲存。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉汙染。

嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

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