艾滋病初篩實驗室的質量管理

【關鍵詞】  艾滋病

    開展HIV抗體檢測是發現傳染源並進行有效管理的基礎，而艾滋病初篩實驗室是發現感染者的第一道關口，保證其檢測工作質量是很重要的。為了更準確、更嚴謹地出示檢測報告，本艾滋病初篩實驗室在參加省級機構室間質評的同時，還進行室內質量控制。現將我室在實際工作中對進行了總結和探討，報告分析如下。

    1  人員要求與培訓

    艾滋病初篩實驗室工作人員必須具有2年以上從事血清學檢測工作經驗，上崗前必須接受省級以上HIV抗體篩查檢測技術培訓並獲得合格證書。在工作中要定期或不定期接受複訓。非衛生專業技術人員不得從事HIV抗體檢測工作。

    2  樣品的採集、處理和儲存

    HIV抗體篩查檢測最常用的樣品是血液，用一次性注射器（或真空採血管）抽取一定量靜脈血，室溫下自然放置1～2h，待血液凝固、血塊收縮後再用3000r/min離心15min，吸出血清備用。採集樣品時應避免溶血和微生物汙染。渾濁或有沉澱的血清樣品應先離心沉澱後取上清液檢測。

    用於抗體檢測的血清或血漿樣品，應存放於-20℃以下，短期（1周）內進行檢測的樣品存放於2～8℃。儘量避免血清樣品反覆凍融產生假陰性結果。

    3  試劑準備

    篩查試劑必須經國家食品藥品監督管理局註冊批准、批檢合格在有效期內的試劑，使用經臨床質量評估敏感性和特異高的試劑。必須是HIV-1/2混合型。

    4  樣品檢測［1，2］

    4.1  將試劑和樣品放置在室溫***18～23℃***, 按HIV抗體篩查檢測的SOP做好試劑準備。

    4.2  備好試劑盒、待檢樣品和外部對照質控血清後，按試劑盒說明書以及質控和安全防護要求進行篩查檢測。注意防止樣品間交叉汙染。

    4.3  複檢試驗  對初篩呈陽性反應的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重複檢測。如兩種試劑複測均呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應，或一陰一陽，需送艾滋病確認實驗室進行確認。

    4.4  初篩試驗結果的報告  對呈陰性反應的樣品，可由實驗室出具HIV抗體陰性報告；對呈陽性反應的樣品，須進行復檢，不能出陽性報告。

    5  裝置維護與校準

    設立常用儀器的維護及校準制度，以保證正常運轉。

    5.1  酶標讀數儀、洗板機  每天：核對濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現象。每週：清潔儀器表面，保護光學零件不沾灰塵。每月：檢查洗滌時各孔是否與相應的沖洗頭對位良好，負壓是否符合規定要求。每年：檢查、清洗濾光片，如果出現破裂或黴點則要更換。根據儀器內具有的校準程式或使用校準板，對濾光片的精密度進行校準並保留記錄。實驗過程中發現異常情況，應隨時進行處理，可根據使用情況更換必要的部件。

    5.2  移液器  1年至少應該標定1次，發現異常情況應隨時進行校準。標定方法包括有色溶液光譜分析法、稱量校準法、同位素計數法以及使用配套校準盒等。校準多道移液器時，必須保證每一個加樣頭都能夠連續、準確地加樣。移液器的精密度應在廠家說明書規定的範圍內。

    5.3  冰箱和孵育箱  必須每天檢查和記錄低溫、超低溫冰箱及孵育箱的溫度，並做好記錄。

    5.4  定期檢查其他儀器裝置  精密儀器及出具實驗結果的儀器必須定期校準，其他儀器定期檢查並做好記錄。每次操作時必須加入相應的外部對照質控血清，並把該結果及時報告給實驗室主任或實驗室質量控制人員。

6  實驗室內質量控制

    6.1  一般使用內部對照質控血清和外部對照質控血清來進行質量控制。內部對照質控血清指試劑盒內提供的陽性和陰性對照血清。內部對照是質量控制的基礎。每一次檢測必須使用內部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質控血清是為了監控檢測的重複性和穩定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實驗室設定的一個弱陽性對照血清，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2～3倍為宜。

    6.2  每一次檢測必須使用外部對照質控血清，繪製質量控制圖。每天檢測結束後，檢測者應把當天外部對照血清測定結果畫在圖上，確定在允許範圍內，方可發出標本檢測報告，這樣做可使檢測者及時分析質量控制圖中出現的各種問題，採取相應措施。

    6.3  在ELISA法檢測HIV試驗中，當外部對照血清的測定結果波動在x+2s範圍內，表明工作正常，結果可靠；若超過x+2s範圍時，系統處於告警狀態，應予注意，及時分析原始資料，對具體檢驗過程進行回顧性分析，查詢原因後給予糾正並重複測試；若超過x+3s範圍時，系統處於失控狀態，本次實驗結果不能被接受，可能是系統誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。

    ***  引起室內質控失控的原因很多。如：換用新批號診斷試劑盒或標準血清、儀器裝置未經檢定、校準或測試、溫育時間和溫度不準確、新的檢驗人員、質控標準血清反覆凍融等，此時要及時查詢原因予以糾正。

    6.5  月底計算當月測定結果的x、s和CV，並與其他月份同一批號質控標準血清所得x、s和CV相比較，通過圖形資料對比進行誤差分析，從而發現常規檢測的精密性和準確性是否發生了變化。

    6.6  所用的外部對照質控血清為低溫冷凍儲存的液體，使用時要融化徹底並充分混勻，達到室溫方可使用。室內質量控制是通過對外部對照質控血清的檢測和分析，推斷和控制常規標本的檢測質量，因此，外部對照質控血清與檢測標本必須同等對待。

    6.7  通常把臨界值上下10％的範圍定為檢測結果灰區。對於檢測過程中出現的灰區標本均應進行重複試測，以減少假陽性和假陰性結果的出現，並對實驗結果和過程進行記錄並存檔儲存。

【參考文獻】
  1 全國艾滋病檢測技術規範.中國疾病預防控制中心，2004，12.

2 梅玲.ELISA檢測HIV的實驗室內質量控制.中華醫學實踐雜誌,2006,5***6***:663-664.