基因二代測序的意義?

什麼是基因二代測序？

二代測序：將基因組DNA打碎成約100-200個鹼基的小片段，在片段的兩個末端加上接頭 ( adapter )。將DNA片段變成單鏈後通過接頭與芯片表面的引物鹼基互補而使一端被固定在芯片上。另外一端隨機和附近的另外一個引物互補，也被固定住，形成橋狀結構。通過30輪擴增反應，每個單分子被擴增大約1000 倍，成為單克隆的DNA簇，隨後將DNA 簇線性化。在下一步合成反應中，加入改造過的DNA聚合酶和帶有4種熒光標記的dNTP。在DNA合成時，每一個核苷酸加到引物末端時都會釋放出焦磷酸鹽，激發生物發光蛋白髮出熒光。用激光掃描反應板表面，在讀取每條模板序列第一輪反應所聚合上去的核苷酸種類後，將這些熒光基團化學切割，恢復3’端黏性，隨後添加第二個核苷酸。如此重複直到每條模板序列都完全被聚合為雙鏈。這樣，統計每輪收集到的熒光信號結果， 就可以得知每個模板DNA片段的序列。（中源-協-和-基-因）

深度測序和普通的二代測序有什麼區別？有什麼應用

有兩種體細胞突變容易被忽視，一種是侷限在特定組織的突變。舉例來說，如果突變只存在於大腦，而我們檢測的是血液，那就找不到這些致病突變。另一種致病性體細胞突變雖然發生在所有組織中，但是隻影響一部分細胞，因此不容易被檢測到。

普通的二代測序，全基因組或外顯子組測序是將DNA分成小片段，然後對各個片段多次讀取（一般是三十次）。然而，如果突變只發生在15-20%的細胞中，三十次讀取還不足以可靠地捕捉到它們，尤其是當突變隻影響一個基因拷貝時。

Walsh和博士後Saumya Jamuar通過“定向高覆蓋度測序”技術，為158名腦部疾病的患者鑑定致病突變，這些患者的症狀包括癲癇、智力障礙、語言障礙等。

研究人員並沒有分析整個基因組或外顯子組（所有蛋白編碼基因），而是把注意力放在一系列已知或有嫌疑的基因上，並且大大提高了測序的深度。

在一些疾病如唐氏綜合徵中，嵌合突變相較於影響全身細胞的突變，產生的症狀要輕一些。但是很少量的變異細胞就足以引發損害人身心健康的症狀，在以往的研究中，為了從普通基因組中檢測到這些突變，研究人員就不得不增加測定的序列數量。而對少數候選基因區域進行的平均300次深度測序，就可以有效辨別被誤認為測序錯誤的突變。

DNA 的 1代測序，2代測序，3代測序的區別是什麼啊？

第一代指雙脫氧末端終止法，擴增後通過毛細管電泳讀取序列，每次獲取數據量少

第二代為高通量測序，採用微珠或高密度芯片邊合成邊測序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次獲得數G數據，相對與第三代，都仍然需要擴增的方法放大信號，擴增後再檢測。

第三代特點是單分子測序，多基於納米科技，無需擴增，對單分鏈DNA/RNA直接用合成、降解、通過納米孔等方式直接測序，核心特點是無需擴增所以成本更低

基因測序後建庫還有必要性嗎

基因測序後建庫還有必要性嗎

庫，不僅僅指DNA文庫，還有cDNA文庫。即使說DNA文庫也是有必要建的，可以研究較長一段染色體DNA的多個基因功能上的關聯性

什麼是普通的基因測序，它和高通量測序有什麼區別嗎

“普通的基因測序”應該是指“常規DNA測序”吧，是用Sanger法（也就是雙脫氧法）進行測序的方法，目前非常普遍的是直接用ABI 3730xl 進行的自動測序，基本上可以做到600bp-800bp的讀長。

高通量測序的概念其實是一個相對的概念，在2000年的時候，3700、MegaBace等儀器上的測序也是高通量測序，是相對手工測序或者跑平板膠來說的。

不過到2005年以後，高通量測序就改指第二代測序（Next generation sequencing），454、Solexa(後改為Illumina）和SOLiD等第二代測序，比3730等第一代測序的通量提高了成千上萬倍，甚至上億倍，所以稱為高通量測序。

NGS的特點主要有：

1、通量高。一個RUN能產生500Mb-600Gb的數據量。

2、讀長相對較短。454(約400-500bp)，llumina（100-250bp），SOLiD（75-100）。

3、單位數據的成本非常低。現在很多項目測序的費用。已經非常低。生物信息分析成本變得更為重要了。