植物轉基因方法?

General 更新 2024-11-14

如何給植物轉基因？

農桿菌介導轉化農桿菌是普遍存在於土壤中的一種革蘭氏陰性細菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數雙子葉植物的受傷部位，並誘導產生冠癭瘤或髮狀根。根癌農

轉基因

桿菌和髮根農桿菌中細胞中分別含有Ti質粒和Ri質粒，其上有一段T-DNA，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞後，可將T-DNA插入到植物基因組中。

因此，農桿菌是一種天然的植物遺傳轉化體系。人們將目的基因插入到經過改造的T-DNA區，藉助農桿菌的感染實現外源基因向植物細胞的轉移與整合，然後通過細胞和組織培養技術，再生出轉基因植株。

農桿菌介導法起初只被用於雙子葉植物中，自從技術瓶頸被打破之後，農桿菌介導轉化在單子葉植物中也得到了廣泛應用，其中水稻已經被當作模式植物進行研究。

花粉管通道法

在授粉後向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道，將外源DNA導入受精卵細胞，並進一步地被整合到受體細胞的基因組中，隨著受精卵的發育而成為帶轉基因的新個體。該方法於80年代初期由中國學者周光宇提出，中國目前推廣面積最大的轉基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培育出來的。該法的最大優點是不依賴組織培養人工再生植株，技術簡單，不需要裝備精良的實驗室，常規育種工作者易於掌握。[14]

核顯微注射法

核顯微注射法是動物轉基因技術中最常用的方法。它是在顯微鏡下將外源基因注射到受精卵細胞的原核內，注射的外源基因與胚胎基因組融合，然後進行體外培養，最後移植到受體母畜子宮內發育，這樣分娩的動物體內的每一個細胞都含有新的DNA片段。-這種方法的缺點是效率低、位置效應(外源基因插入位點隨機性)造成的表達結果的不確定性、動物利用率低等，在反芻動物還存在著繁殖週期長，有較強的時間限制、需要大量的供體和受體動物等特點。

詳細步驟：在顯微鏡下，用一根極細的玻璃針（直徑1-2微米）直接將DNA注射到胚胎的細胞核內，再把注射過DNA的胚胎移植到動物體內，使之發育成正常的幼仔。用這種方法生產的動物約有十分之一是整合外源基因的轉基因動物。

基因槍法

利用火藥爆炸或高壓氣體加速（這一加速設備被稱為基因槍），將包裹了帶目的基因的DNA溶液的高速微彈直接送入完整的植物組織和細胞中，然後通過細胞和組織培養技術，再生出植株，選出其中轉基因陽性植株即為轉基因植株。與農桿菌轉化相比，基因槍法轉化的一個主要優點是不受受體植物範圍的限制。而且其載體質粒的構建也相對簡單，因此也是轉基因研究中應用較為廣泛的一種方法。

精子介導法

轉基因技術圖示

精子介導的基因轉移是把精子作適當處理後，使其具有攜帶外源基因的能力。然後，用攜帶有外源基因的精子給發情母畜授精。在母畜所生的後代中，就有一定比例的動物是整合外源基因的轉基因動物。

同顯微注射方法相比，精子介導的基因轉移有兩個優點：首先是它的成本很低，只有顯微注射法成本的1/10。其次，由於它不涉及對動物進行處理，因此，可以用生產牛群或羊群進行實驗，以保證每次實驗都能夠獲得成功。

核移植轉基因法

體細胞核移植是一種轉基因技術。該方法是先把外源基因與供體細胞在培養基中培養，使外源基因整合到供體細胞上，然後將供體細胞細胞核移植到受體細胞——去核卵母細胞，構成重建胚，再把其移植到假孕母體，待其妊娠、分娩，便可得到轉基因的克隆動物。

體細胞核移植法

先在體外培養的體細胞中進行基因導入，篩選獲得帶轉基因的細胞。然後，將帶轉基因體細胞核移植到去掉細胞核的卵細胞中，生產重構胚胎。重構胚胎經移植到母體中，產生的仔畜百分之百是轉基因動物。...

植物有哪些轉基因方法

轉基因的方法，也就是基因工程，亦稱轉基因技術。步驟：

1）獲取目的基因

2）通過載體將其導入宿主細胞

3）使其在宿主細胞內表達

4）檢驗表達

其中有限制性內切酶，DNA連接酶，質粒等。工具酶十分重要。

植物轉基因實驗的具體流程是怎樣的

具體流程很複雜，不過大致分為這幾步：目的基因的獲得；目的基因與載體的連接、轉化大腸桿菌；陽性菌篩選、擴繁；重組子提取；轉化農桿菌；陽性農桿菌篩選、擴繁；農桿菌侵染植物生殖器官；陽性種子篩選；自交或回交穩定陽性植株篩選。大致就這樣吧！方法很多這只是其中一種。

什麼叫轉基因植物？植物轉基因技術的基本路線主要包括那些

轉基因植物(Transgene plants)是擁有來自其他物種基因的植物。該基因變化過程可以來自不同物種之間的雜交，但今天該名詞更多的特指那些在實驗室裡通過重組DNA技術人工插入其他物種基因以創造出擁有新特性的植物。

方法：

①農桿菌介導法

農桿菌的Ti質粒可以作為載體。Ti質粒上有兩個區域，一個是T-DNA區，這是能夠轉移並整合進植物受體的區段；另一個是Vir區，它編碼實現質粒轉移所需的蛋白質。將待轉化的外源基因先克隆在大腸桿菌質粒上，然後將此質粒轉入不會引起冠癭瘤的農桿菌（這種菌的Ti質粒已除去了T-DNA），使外源基因通過同源重組整合在Ti質粒上；然後用帶有外源基因的這種農桿菌去轉化植物細胞，將外源基因轉入植物細胞的基因組。

②直接轉入法

這是將裸露的DNA直接導入植物細胞，然後將這些細胞在體外培養再生出植株。裸露的DNA的轉化效率較低，因而要輔之以高效率的組織培養系統。

植物細胞有一層很厚的細胞壁，因此需先去除植物細胞壁，使之成為原生質體，然後用來直接轉入外源DNA。當然，也可用機械的方法將DNA直接注入植物細胞而毋須去除細胞壁，這類方法有用顯微操縱儀把DNA直接注入植物細胞，也可在金屬微粒上蘸塗了外源DNA，把它當作子彈，用“基因槍”轟擊植物組織而進入植物細胞。

③原生質體融合

將不同物種的原生質體進行融合，可實現兩種基因組的結合。也可將一種細胞的細胞器，如線粒體或葉綠體與另一種細胞融合，此時，是一種細胞的細胞核處於兩種細胞來源的細胞質中，這就形成了胞質雜種（cybrid）。

④花粉管通道法

在授粉後向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道，將外源DNA導入受精卵細胞中，並進一步整合到受體細胞的基因中，隨受精卵的發育而成為轉基因新個體。該方法是由中國學者在20世紀80年代提出的。中國目前推廣面積最大的轉基因抗蟲棉就是採用花粉管通道法培育出來的。

轉基因植物有哪些分析鑑定方法

分析、確定了75個品種的轉基因構建成分,為開展轉基因檢測奠定了基礎。

2、不同類型的植物提取基因組DNA的方法略有差異,該研究優化了CTAB、SDS快速提取法,並選擇了磁珠吸附試劑盒法,成功提取了適合於PCR反應的植物基因組DNA。

3、以植物內源基因18SrRNA為靶標,設計、優化後篩選出特異性引物和探針,建立了以18SrRNA為目標的檢測植物基因組DNA提取質量的PCR與熒光PCR鑑定體系。

4、首次以CaMV35S、FMV啟動子、NOS終止子、標記基因NPTII、抗除草劑基因EPSPS、PAT、抗蟲基因CryIAb為檢測目標,設計、篩選出特異性引物,優化實驗參數,建立了轉基因植物PCR定性檢測方法體系,靈敏度達0。

1﹪。

5、克隆了CaMV35S、FMV啟動子、NOS終止子、標記基因NPTII、抗除草劑基因EPSPS、PAT、抗蟲基因CryIAb的陽性質粒作為轉基因植物檢測的陽性對照。

6、於反應體系中引入UNG酶,建立了無汙染的熒光PCR擴增體系。

7、首次以FAM熒光素標記探針5端作為發光基團,以TARMA標記探針3端為淬滅基團,以CaMV35S、FMV啟動子、NOS終止子、標記基因NPTII、抗除草劑基因EPSPS、PAT、抗蟲基因CryIAb為檢測目標,設計、篩選出特異性引物和探針,優化實驗參數,建立了轉基因植物通用性熒光PCR定性檢測方法體系。

8、以FAM和TET兩種熒光素標記外源基因和內源基因,建立了轉基因大豆抗除草劑基因EPSPS和轉基因玉米抗蟲基因CryIAb的熒光PCR定量檢測體系,兩體系的靈敏度均達到0。

1﹪以上。