蛋白質在PH等於等電點時，溶解度最小。本文主要介紹了利用沉澱實驗測定蛋白質等電點的實驗原理、器材、試劑和具體操作步驟。
方法/步驟
目的
(1)瞭解蛋白質的兩性解離性質。
(2)學習測定蛋白質等電點的一種方法。
原理
蛋白質是兩性電解質。蛋白質分子的解離狀態和解離程度受溶液的酸鹼 度影響。當溶液的pH 達到一定數值時，蛋白質顆粒上正負電荷的數目相等， 在電場中，蛋白質既不向陰極移動，也不向陽極移動，此時溶液的pH 值稱 為此種蛋白質的等電點。不同蛋白質各有其特異的等電點。在等電點時，蛋 白質的理化性質都有變化，可利用此種性質的變化測定各種蛋白質的等電 點。最常用的方法是測其溶解度最低時的溶液pH 值。
本實驗借觀察在不同pH 溶液中的溶解度以測定酪蛋白的等電點。用醋 酸與醋酸鈉(醋酸鈉混合在酪蛋白溶液中)配製成各種不同pH 值的緩衝液。 向諸緩衝溶液中加入酪蛋白後，沉澱出現最多的緩衝液的pH 值即為酪蛋白 的等電點。
器材
(1)水浴鍋(2)溫度計(3)200mL 錐形瓶
(4)100mL 容量瓶(5)吸管(6)試管
(7)試管架(8)乳鉢
試劑
(1)0.4%酪蛋白醋酸鈉溶液200mL
取0.4g 酪蛋白，加少量水在乳鉢中仔細地研磨，將所得的蛋白質懸膠 液移入200 mL 錐形瓶內，用少量40～50℃的溫水先洗滌乳鉢，將洗滌液也 移入錐形瓶內。加入10mL1mol/L 醋酸鈉溶液。把錐形瓶放入到50℃水浴中， 並小心地旋轉錐形瓶，直到酪蛋白完全溶解為止。將錐形瓶內的溶液全部移 至100mL 容量瓶內，加水至刻度，塞緊玻塞，混勻。
(2) 1.00mol/L 醋酸溶液100mL
(3)0.10mol/L 醋酸溶液100mL
(4)0.01mol/L 醋酸溶液50mL
操作
(1)取同樣規格的試管4 支，按下表順序分別精確地加入各試劑，然後混勻①。
(2)向以上試管中各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL,加一管,搖勻一管。此時1、 2、3、4 管的pH 依次為5.9、5.3、4.7、3.5。觀察其混濁度。靜置10 分 鍾後，再觀察其混濁度。最混濁的一管的pH 即為酪蛋白的等電點。