總結各種WB可能出現的問題及其如何應對！
工具/原料
免疫印跡
western-blot
方法/步驟
目的蛋白訊號弱。
轉膜效率低。
顯色或曝光後無條帶。
背景過高。
注意事項。
1、免疫印跡雜交的敏感與檢測系統有關。因此,凝膠電泳時的蛋白上樣量應該保證被檢測抗原量不至於太低，如果過低應該重新純化和濃縮使用，或者建議做一次梯度稀釋。
2、形成凝膠的試劑要有足夠的純度,啟用劑的濃度適當，不僅可以決定凝膠聚合的速度,也將影響凝膠的質量,聚膠時的溫度也將影響凝膠聚合的速度。因此，建議要根據不同溫度下適量增減啟用劑的用量以保證分離膠從加入啟用劑起至開始出現凝膠凝聚的時間為15-20分鐘最佳,對於濃縮膠最佳聚合時間為8-10分鐘開始可見聚合。灌完分離膠加水封閉分離膠與外界氧氣的結合。
3、未聚合的丙烯醯胺具有神經毒性,操作時應該戴手套口罩防護。梳子插入濃縮膠時，應確保沒有氣泡，可將梳子稍微傾斜插入以減少氣泡的產生，梳子拔出來時應該小心,不要破壞加樣孔，如有加樣孔上的凝膠歪斜可用針頭插入加樣孔中糾正但要避免針頭刺入膠內。
4、加樣前樣品應先離心，尤其是長時間放置的樣品,以減少蛋白質帶的拖尾現象 。
5、為避免邊緣效應，可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩衝液 。
6、上樣時，小心不要使樣品溢位而汙染相臨加樣孔 。
7、樣品緩衝液中煮沸的樣品可在-20℃存放數月，但是反覆凍融會使蛋白質降解。
8、為減少蛋白質條帶的擴散,上樣後應儘快進行電泳，電泳結束後也應儘快轉印。
9、取出凝膠後應注意分清上下，可用刀片切去凝膠的一角作為標記(如左上角)轉膜時也應用同樣的方法對PDVF膜做上標記(如左上角)以分清正反面和上下關係。
10、轉膜時應依次放好PDVF膜與凝膠所對應的電極,即凝膠對應負極,PDVF膜對應正極。