HA-HI試驗是測定血清抗體滴度的常規方法,試驗的原理是抗原抗體中和反應,是動物醫學專業必須掌握的試驗技能。那麼,在這個試驗中非常關鍵的一步就是配製四單位病毒抗原,那麼如何正確的操作呢?下面是小編總結的一些試驗過程和注意事項,供需要的朋友參考。
工具/原料
PBS緩衝液、1%雞紅細胞、單道和多道移液器及吸頭、20ml青瓶及塞子、96孔微量血凝板等
方法/步驟
為什麼要用四單位病毒
經過大量的試驗數據顯示,只有四單位的病毒抗原濃度才能最好的反應血清抗體的水平,四單位是人為規定的。
試驗前準備
準備好配製四單位抗原所需的所有材料,包括病毒抗原、PBS緩衝液、1%雞紅細胞、單道和多道移液器及吸頭、20ml青瓶及塞子、96孔微量血凝板等。
測定病毒的血凝滴度(HA試驗)
如何測定病毒的血凝滴度,詳見本小編的“血凝(HA)試驗操作攻略”一文。
假設測得的血凝滴度為2的8次方,則四單位病毒的稀釋倍數為2的6次方(2的8次方除以4),即64倍稀釋。
計算抗原用量
根據所需的四單位抗原的總量來確定抗原液的用量。
比如,需四單位抗原總量為20ml,則利用公式:抗原原液*64(稀釋倍數)=20ml,求出抗原原液的體積為0.312ml,需要PBS緩衝液的體積約19.7ml,根據計算的結果配置即可。
配製四單位抗原
取PBS緩衝液19.7ml,加入20ml的小青瓶中,取0.312ml的病毒抗原液,加入到緩衝液中,蓋上塞子,充分混勻,最好用渦旋儀混勻,至此,四單位抗原配製完成。
使用
四單位抗原是進行HI試驗必須的,使用前還要進行四單位的驗證,驗證成功後就可以用了。
注意事項
配置的四單位抗原儘量比需要的體積多一些,以防不夠用。
四單位抗原最好現配現用,以保證抗原的穩定性。
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