實驗技能:蛋白質的提取?

提取細胞內蛋白質試講組織細胞或培養細胞破碎,使細胞內的物質釋放到緩衝液中的過程。

實驗技能:蛋白質的提取

1.機械破碎法(勻漿)

利用機械力將細胞破碎。常用的裝置:高速組織搗碎機,勻漿器,研鉢等。

不同組織的特性來選擇不同的方法,動物的胰肝腦一般較柔軟,用普通勻漿器研磨即可,而肌及心肌組織較韌,需預先攪碎成勻漿。

實驗技能:蛋白質的提取

2.超聲破碎法

利用震盪頻率為15-25KHz的超聲波在細胞液中產生的空化效應和機械效應將細胞膜破碎的方法,多用於細胞裂解。

實驗技能:蛋白質的提取

注意事項:(1)為了避免在溶液中產生泡沫,要將超聲探頭完全置於液麵以下,並不接觸的前提下儘可能靠近容器底部。(2)應該使用塑料試管,避免使用玻璃試管。(3)超聲劑量應由樣品量和菌體來決定,攻率可以在200-600w。過強的超聲波可導致多聚物降解和蛋白失活。如果超聲出現沉澱說明超聲功率太大。(4)一般超聲5-10s,反覆多次。(4)將試管置於冰水中以避免蛋白質變性和失活。

3.反覆凍融法

將細胞在-20度以下或液氮條件下冰凍,室溫溶解,反覆多次。

特點:成本低,操作簡便,過程緩慢,但不適用於對溫度比較敏感的蛋白質。

實驗技能:蛋白質的提取

4.表面活性劑裂解及酶解法

自溶法:利用自身的酶將細胞破使細胞內物質釋放出來。該法比較穩定,且蛋白不易分解。自溶過程中PH會有顯著的變化。

實驗技能:蛋白質的提取

酶融法:利用生物酶使細胞成分溶於溶劑中。

實驗技能:蛋白質的提取

表面活性劑處理:通過破壞細胞膜磷脂雙分子層將胞內物質釋放出來。

實驗技能:蛋白質的提取

技能, 過程, 物質, 蛋白質, 細胞,
相關問題答案