使用目的：
本試劑盒用於測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中白介素6(IL-6)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠白介素6(IL-6)水平。用純化的大鼠白介素6(IL-6)抗體包被微孔板，製成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6)，再與HRP標記的白介素6(IL-6)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物，經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素6(IL-6)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠白介素6(IL-6)濃度。
標本要求
1．標本採集後儘早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應儘快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於-20℃儲存，但應避免反覆凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加於酶標板孔底部，儘量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘。
3.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用
4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
5.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
6溫育：操作同3。
7.洗滌：操作同5。
8顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震盪混勻，37℃避光顯色15分鐘.
9終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
10.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液後15分鐘以內進行。
操作程式總結：
計算
以標準物的濃度為橫座標，OD值為縱座標，在座標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中儲存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請最後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉汙染。
6．底物請避光儲存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
儲存條件及有效期
1．試劑盒儲存：；2-8℃。
2．有效期：6個月